¿Cómo elegir la columna correcta?

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Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① Matriz de relleno de columna cromatográfica A. Matriz de gel de sílice: alta pureza, bajo costo, alta resistencia, fácil modificación química, pero el rango de pH es limitado. La mayoría de los rellenos de matriz de sílice son estables entre......

① Matriz de relleno de columna cromatográfica
A. Matriz de gel de sílice: alta pureza, bajo costo, alta resistencia, fácil modificación química, pero el rango de pH es limitado. La mayoría de los rellenos de matriz de sílice son estables entre pH 2-8, pero la fase ligada de gel de sílice especialmente modificada se puede estabilizar a pH 1,5-10.
B. Matriz de polímero: amplio rango de pH de aplicación, temperatura estable (la temperatura alta puede alcanzar más de 80 grados) y baja resistencia mecánica.
②Forma de partícula
La mayoría de los rellenos de HPLC modernos son partículas esféricas, pero a veces partículas irregulares. Las partículas esféricas proporcionan una presión de columna más baja, una mayor eficiencia y estabilidad de la columna y una vida útil más larga de la columna. Cuando se utiliza una fase activa de alta viscosidad; las partículas irregulares tienen un área de superficie específica más grande y un precio relativamente bajo.
③Tamaño de partícula
Cuanto más pequeño sea el tamaño de partícula, mayor será la eficiencia y la resolución, pero al mismo tiempo conducirá a una mayor caída de presión de la columna. Elija material de empaque de 1.5-3 μm para resolver algunas muestras complejas, UPLC puede usar empaque de 1.5 μm; se utiliza otro relleno de tamaño de partícula de 10 μm o mayor como columna semipreparativa o preparativa.
④Contenido de carbono
El contenido de carbono de una columna cromatográfica se refiere a la proporción de la fase ligada en la superficie del gel de sílice, que está relacionada con el área de superficie específica y la cobertura de unión. El alto contenido de carbono mejora la capacidad de la columna, la resolución y el tiempo de análisis, y se usa para muestras complejas que requieren alta resolución; El bajo contenido de carbono tiene un tiempo de análisis corto y exhibe una selectividad diferente, y se utiliza para el análisis rápido de muestras simples y fases activas con alto contenido de agua. Muestras de condición. En general, el contenido de carbono de C18 oscila entre el 7 y el 19 %.
⑤ Tamaño de poro y área de superficie específica
El medio de adsorción de HPLC son partículas porosas y la mayor parte de la superficie de reacción está en los poros. Por lo tanto, las moléculas deben entrar en los poros para ser adsorbidas y separadas.
El tamaño de poro de la columna cromatográfica y el área superficial específica son dos conceptos complementarios. El tamaño de poro es pequeño y el área superficial específica es grande, y viceversa. Gran área de superficie específica, aumenta la reacción entre la muestra y la fase unida, aumenta el almacenamiento, la carga de la muestra y la separación de componentes complejos; área de superficie específica pequeña, tiempo de equilibrio rápido, adecuado para análisis de gradiente.
⑥ Volumen de poros y resistencia mecánica
volumen de poro, también conocido como "volumen de poro". Se refiere al tamaño del volumen vacío por partícula. Puede reflejar bien la resistencia mecánica del relleno. Los rellenos con un volumen de poros grande tienen una resistencia mecánica ligeramente más débil que aquellos con un volumen de poros pequeño. Los rellenos con un volumen de poro de 1,5 ml/g o menos se usan principalmente para la separación por HPLC, mientras que los rellenos con un volumen de poro superior a 1,5 ml/g se usan para cromatografía de exclusión por tamaño y cromatografía de baja presión.
⑦ tapa final
La protección de los extremos de las columnas puede reducir los picos de cola de los compuestos básicos polares debido a la interacción con los grupos silanol expuestos. La fase ligada no bloqueada tendrá una selectividad diferente en comparación con la fase ligada bloqueada, especialmente para muestras polares.