¿Cómo limpiar y regenerar la columna después de la contaminación?

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Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Cuando una columna cromatográfica está contaminada, su comportamiento cromatográfico será algo diferente al de una columna no contaminada. Las columnas contaminadas pueden causar problemas de contrapresión. La columna de fase reversa contaminada ......

Cuando una columna cromatográfica está contaminada, su comportamiento cromatográfico será algo diferente al de una columna no contaminada. Las columnas contaminadas pueden causar problemas de contrapresión. La columna de fase reversa contaminada debe limpiarse y regenerarse para restaurar las condiciones operativas originales.
La clave para regenerar una columna de HPLC contaminada es conocer la naturaleza del contaminante y encontrar un disolvente adecuado para eliminarlo. Si la contaminación es causada por la acumulación de sustancias fuertemente retenidas durante inyecciones repetidas, los pasos simples para eliminar estos contaminantes a menudo pueden restaurar el comportamiento cromatográfico. A veces, después de muchas operaciones, la columna cromatográfica se lava con 90-100 % de solvente B (el solvente más fuerte en el sistema de fase inversa de dos solventes) durante 20 volúmenes para eliminar los contaminantes. Por ejemplo, se pueden usar solventes no acuosos como metanol, acetonitrilo y tetrahidrofurano para los lípidos residuales en la columna.

En términos generales, todos los métodos de limpieza tienen formas similares. Los disolventes utilizados aumentan con la fuerza del disolvente. A menudo, el último disolvente es muy hidrofóbico (como el acetato de etilo o incluso un hidrocarburo) y puede usarse para disolver sustancias no polares como lípidos y aceites. Debemos asegurarnos de que cada solvente en una serie de solventes se pueda mezclar con el siguiente solvente.
Al final del proceso de limpieza, es necesario volver al sistema solvente original con la ayuda de un solvente miscible de fuerza media. Por ejemplo, el isopropanol es un disolvente muy bueno como paso intermedio porque es miscible con n-hexano o diclorometano y también con disolventes en fase acuosa. Sin embargo, la viscosidad del isopropanol es muy alta y se debe garantizar un caudal bajo para evitar una presión de bomba excesiva. Al enjuagar la columna cromatográfica, el líquido de enjuague se conecta directamente a la botella de desecho desde el extremo de salida de la columna cromatográfica y no puede fluir a través de la celda de detección para evitar la contaminación de la celda de detección.
La columna cromatográfica de fase inversa no utiliza solución tampón, utilice la siguiente serie de disolventes para regenerar:
100 % metanol → 100 % acetonitrilo → 75 % acetonitrilo-25 % isopropanol → 100 % isopropanol → 100 % cloruro de metileno → 100 % n-hexano → 100 % cloruro de metileno → 100 % isopropanol → 100 % acetonitrilo .
La columna de cromatografía de fase inversa utiliza una solución tampón, utilice la siguiente serie de disolventes para regenerar:
agua → acetonitrilo → cloroformo (o isopropanol) → acetonitrilo → agua.